М. И. Потапович бгу, Минск



Дата01.07.2017
өлшемі445 b.


Получение рекомбинантных белков как этап создания лечебно-профилактических препаратов

  • М. И. Потапович

  • БГУ, Минск

  • 2011 г.


Биофармацевтический рынок (C.L. Barton, 2010)

  • Мировой рынок биофармацевтической продукции в 2010 г. составил около $100 млрд.

  • К 2015 г. – более $170 млрд. (65% - рекомбинантные белки)

  • В сегменте негликозилированных рекомбинантных белков первую позицию занимает интерферон ($4 млрд. к 2014 г., из них альфа-интерферон – $1,5 млрд.)







Характеристики различных типов экспрессионных систем







Посадка праймеров при замене редких кодонов в структурной части гена свиного ИФН-α



Схема синтеза гена свиного ИФН-α при замене редких кодонов

  • agg → cgt

  • aga → cgt

  • ccc → ccg

  • gga → ggc Стадия 1

  • (матрица – тотальная ДНК, выделенная из крови)



A. Структурная часть гена лошадиного ИФН-α

  • A. Структурная часть гена лошадиного ИФН-α

  • B. Структурная часть гена бычьего ИФН-γ

  • Цветом выделены редко встречающиеся в E. coli аминокислотные

  • кодоны.

  • AGG/AGA – аргинин, CTA – лейцин, CCC – пролин, GGA – глицин



Codon Adaptation Index (CAI)

  • CAI – величина, показывающая частоту использования кодонов в данном гене относительно частоты использования кодонов в референсном наборе генов

  • Ген куриного ИФН-α: CAI = 0,435

  • Ген свиного ИФН-α: CAI = 0,330

  • Ген свиного ИФН-α с заменой редких кодонов = 0,544

  • Ген лошадиного ИФН-α: CAI = 0,340

  • Синтетический ген бычьего ИФН-γ: CAI = 1,0

  • (Расчет с использованием программы CodonW (J. Peden))



Накопление лошадиного ИФН-α (A) и бычьего ИФН-γ (B) в клетках E. coli BL21 (λDE3)



А. Тельца включения в клетках E. coli (S. Betts, 1998)

  • А. Тельца включения в клетках E. coli (S. Betts, 1998)

  • В. Электронная микрофотография клеток E. coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL-pIP2403 (трансмиссионный электронный микроскоп Philips CM120 BioTwin), выращенных без индукции ИПТГ

  • С. Электронная микрофотография клеток E. coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL-pIP2403 после индукции 0,5 ммоль/л ИПТГ в течение 3 часов



Бычий ИФН-α (А) после очистки из телец включения (5 стадий) и бычий ИФН-γ (B), очищенный из супернатанта после разрушения клеток (1 стадия)





Рекомбинантные α-интерфероны

  • Субстанция интерферона

  • рекомбинантного

  • Вирусные заболевания

  • Иммуномодулятор

  • Стрессовые состояния



1 - противовирусный эффект;

  • 1 - противовирусный эффект;

  • 2 - подавление роста и развития внутриклеточных инфекционных агентов

  • невирусной природы (хламидии, риккетсии, бактерии, простейшие);

  • 3 - увеличение лизоцимной активности сыворотки крови;

  • 4 – увеличение бактерицидной активности сыворотки крови;

  • 5 – антитоксическое и антистрессовое действие;

  • 6 – радиопротективный эффект;

  • 7 – стимуляция макрофагов и усиление фагоцитоза;

  • 8 – усиление продукции антител;

  • 9 – активизация естественных киллерных клеток;

  • 10 – усиление синтеза простагландинов;

  • 11 – стимуляция освобождения гистамина базофилами;

  • 12 – усиление формирования антигенов ГКГ;

  • 13 – подавление гиперчувствительности замедленного типа;





Каталог: microbio -> files
files -> Регуляция метаболизма у бактерий Существуют 2 способа регуляции метаболизма у бактерий
files -> Фиксация молекулярного азота (азотфиксация, диазотрофия) микроорганизмами
files -> Вопросы для подготовки к зачету по курсу «Экология микроорганизмов»
files -> Литература основная Готтшалк, Г. Метаболизм бактерий / Г. Готтшалк. М.: Мир, 1982
files -> Ученые, внесшие существенный вклад в развитие микробиологии
files -> История микробиологии


Достарыңызбен бөлісу:


©stom.tilimen.org 2019
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет