Количественное определения фибриногена



Дата15.07.2017
өлшемі58.33 Kb.



Тест-система "Количественное определения фибриногена" / FIBRINOGEN ASSAY

Кат ном 5376 (на 200 -400 определений)
I. Применение

Этот набор предназначен для количественного определения фибриногена (ФГ) в плазме крови человека.

Метод Клаусса – простой метод количественного определения фибриногена, основанный на измерении времени образования сгустка. Метод проводится в разведенной плазме после добавления тромбинового реактива (> 30 единиц/мл NIH).

Время образования сгустка пропорционально концентрации фибриногена. Уровень фибриногена может увеличиваться при воспалении, беременности или при приеме оральных контрацептивов. Низкие значения могут наблюдаться при заболеваниях печени и ДВС. Для диагностики врожденных дефицитных состояний, включая афибриногенемию (полное отсутствие фибриногена), гипофибриногенемию (концентрация фибриногена менее 1 мг/мл) и дисфибриногенемию (структурные нарушения в молекуле фибриногена).


II. Меры предосторожности

Реактивы, содержавшиеся в этом наборе, предназначены только для диагностики in vitro. Не принимать внутрь.

При работе с любым из компонентов набора реагентов применяйте соответствующую защитную одежду. В реактивах не содержится антигенов к гепатиту B (HBsAg), Anti-HCV и HCV антителам. Рассматривайте реактивы как источник потенциальной биологической опасности и, в связи с этим, применяйте все меры предосторожности.
III. Реактивы

1. Тромбиновый реактив. (5х4мл)

Каждый флакон содержит приблизительно 200 единиц NIH бычьего тромбина со стабилизаторами.



Приготовление. Добавьте в каждый флакон 2,0мл коалиновой суспензии (0,5 г/л) и 2,0 мл дист. воды. Аккуратно перемешайте. Убедитесь в полной растворимости реагента. Тромбиновый реагент можно использовать через 15 минут после приготовления. Не трясти.

  1. Фибриногеновый калибратор.(2х1мл)

Флакон содержит 1мл лиофилизованной человеческой плазмы с точно известным значением фибриногена.

Приготовление. Добавьте ровно 1 мл дистиллированной воды. Осторожно перемешайте и оставьте на 10 минут. Еще раз перемешайте перед использованием. Не трясти.

  1. Вероналовый буфер (2х25мл)

Каждый флакон (объем 25мл) содержит водный раствор фенобарбитала, натрия хлорида и натрия азида.

Приготовление. Буфер готов к использованию.

  1. Каолиновая суспензия (2х5мл)

Каждый флакон (объем 5,0мл) содержит водный раствор каолина. Концентрация коалина - 0,5 г/л.
Приготовление. Суспензия готова к использованию. Перед применением хорошо премешать.

  1. Другие компоненты набора.

Также в набор вложена инструкция и листок со значением калибратора.
IV. Хранение и стабильность

Запечатанные флаконы стабильны до окончания срока годности при условии правильного хранения (указано на упаковке).



  1. Тромбин реагент

После приготовления, реактив устойчив в течение 8 часов при комнатной температуре , 1 неделю при 2÷6°C или 1 мес. при -20С.

  1. Фибриногеновый калибратор

После разведения стабилен 4 часа при температуре 2-6°C.

  1. Вероналовый буфер

  2. Хранить при 2-6°C.


V. Забор и приготовление образцов

Используйте пластиковые или силиконизированные пробирки. Кровь (9 частей) должна быть собрана с антикоагулянтом (1 часть) цитратом натрия 3,8 % или 3,2 %. Отделите плазму после центрифугирования при 2000-3000 g, в течение 15 минут. Плазма должна храниться при температуре 2-8°C. Анализ необходимо проводить в течение 2 часов после отбора проб, либо плазма может быть заморожена при -20°C и храниться в течение 2 недель или при -70°C в течение одного месяца. Перед проведением анализа необходимо разморозить плазму при 37°C. Не держите плазму при 37°C больше 5 минут.


VI. Пошаговое руководство

Реактивы подходят для использования на любом коагулометре, пригодном для выполнения анализа фибриногена по методу Клаусса.

За детальной инструкцией обратитесь к Руководству Оператора и/или используйте инструкцию производителя реагентов.

Подготовьте все реактивы.


Калибровка.

Новая калибровка должна использоваться при изменении номера партии реагентов или если ожидаемые значения контроля выходят за пределы референсных значений.

Разведите калибратор буфером как указано в таблице.

Аккуратно перемешайте.

( При необходимости можно для калибровки ограничиться и тремя разведениями: 1:5; 1:10; и 1:20 (или1:15)

Приготовление образцов.

Смешайте 1 часть плазмы пациента или контроля с 9 частями вероналового буфера.



Анализ ( мануальный метод)

Выполняйте все тесты в дубле.



  1. Отберите пипеткой 0,2мл стандарта, пробы пациента или контроля в реакционную пробирку и инкубируйте в течение 2 минут при 37°C.

  2. Добавьте 0,1мл тромбинового реактива (инкубируемого при 20-25°C).

  3. Определите время свертывания с точностью 0,1 секунды.

  4. На миллиметровой бумаге (вложенной в набор реагентов) отложите по оси Y значения времени свертывания стандарта, а по оси X концентрацию фибриногена.

  5. Должна быть получена прямая линия. Определите значения калибратора фибриногена в разведении 1+9, интерполируйте полученное значение с целью контроля стандартной кривой.


VII. Контроль качества

Каждая лаборатория должна установить программу контроля качества.

Нормальный и патологичный контроль должен проводиться с каждой партией образцов пациентов, чтобы гарантировать работу анализатора и оператора. Компания Helena предлагает следующие контроли:

кат ном 5301 SAC 1.

кат ном 5302 SAC 2.

кат ном 5186 Norm-Trol 1.

кат ном 5187 Ab-Trol 2.

кат ном 5183 Ab-Trol 3.


VIII. Референсные значения

Референсные значения могут меняться между лабораториями в зависимости от используемых методов и анализаторов. По этой причине каждая лаборатория должна установить свои собственные референсные значения. Ожидаемые значения для фибриногена у здоровых взрослых доноров составляют 2-4 г/л.


IX. Ограничения

Уровень гепарина > 0,6 ед/мл и продуктов деградации фибрина > 100mg/ml может привести к получению ложно заниженных результатов. Если значения некоторых пациентов выпадают из калибровочной кривой, то проведите повторный анализ, используя соответствующее разведение, чтобы привести значения в стандартный диапазон.




X. Аналитические характеристики

Приведенные характеристики должны рассматриваться только как пример.

Каждая лаборатория должна их устанавливать сама.

Линейность этого метода лежит в диапазоне 1.5÷6.5 г/л.



Воспроизводимость.

В одной аналитической серии



Фибриноген г/л

CV

n

1.24

4.88

5

3.01

3.58

5




Между аналитическими сериями


Фибриноген г/л

CV

n

1.02

6.17

10

3.62

3.78

10


XI. Литература

  1. Clauss, A.,’Gerinnungsphysiologische Schnell-methode zur Bestimmung des Fibrinogens’ Acta Haematol., 1957, 17 : 237-246.

  2. Shaw, T. S.,’Assays for Fibrinogen and its Derivatives’ CRC Crit. Rev. Clin. Lab. Sci., 1977, 8: 145-192.

  3. Scully, R. E. et al.,’Normal Reference Laboratory Values’, N. Eng. J. Med., 1980, 302(37) : 37-48.

Okuno, T. et Selenko, V., Amer. J. Med. Tech., 1972, 38(6): 196-201.
Каталог: files
files -> 1 дәріс : Кіріспе. Негізгі түсініктер мен анықтамалар. Тиеу-түсіру жұмыстары жөніндегі жалпы түсініктер
files -> Қыс ең зақымданатын жыл мезгілі. Бірақ жаралану, сынық, тоңазу, үсіп қалу біздің қысқы тұрмыстың міндетті салдары емес
files -> Қазақ халқының ұлттық ойындары
files -> Тема: Детский травматизм. Травма мягких тканей лица и органов рта у детей. Особенности первичной хирургической обработки ран лица. Показания к госпитализации ребенка
files -> Тематичний план практичних занять


Достарыңызбен бөлісу:


©stom.tilimen.org 2019
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет